qPCR法支原體檢測程序中,陰性對照(NCS)和空白對照(BLK)的區(qū)別:陰性對照(NCS):為樣品稀釋液經(jīng)核酸提取純化后所得,在提取純化前同待測樣品一樣需加入IC,NCS用于監(jiān)測提取環(huán)節(jié)是否存在紕漏,比如:操作問題、試劑性能異常、提取環(huán)節(jié)出現(xiàn)污染等情況;空白對照(BLK):在PCR檢測環(huán)節(jié)加入的對照品,BLK為純水,不含IC/支原體核酸;BLK用于監(jiān)測檢測環(huán)節(jié)是否出現(xiàn)污染,如:檢測試劑盒污染、試劑配制間的環(huán)境污染等;南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定性檢測樣品中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋100多種支原體DNA序列,檢測快速,專一性強,靈敏度高,性能可靠,且能提供國際第三方檢測機構(gòu)出具的性能驗證報告,符合中、日、美國家的藥典要求。本公司還提供多樣化提取試劑盒,支持手工、自動化提取,自動化提取試劑盒又包括預(yù)分裝和非預(yù)分裝規(guī)格,客戶可根據(jù)實際情況進行訂購。傳統(tǒng)的支原體檢測方法好不好?上海肺炎支原體檢測服務(wù)
常用的支原體檢測方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會出現(xiàn)假陰性結(jié)果,因此被譽為支原體檢測金標準。不過也存在四個弊端,一是檢測時間太長,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間;二是盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類,分離培養(yǎng)法也有力所不及的時候,例如豬鼻支原體(M.hyorhinis);三是易出現(xiàn)假陽性,因為在培養(yǎng)時需以陽性菌株為對照,易出現(xiàn)交叉污染;四是對實驗室條件要求比較高。杭州正揚生物支原體檢測產(chǎn)品支原體檢測時檢出率比較高的支原體有哪些?
中國藥典ChP2020〈9201〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關(guān)性能驗證的要求,包括檢測限(LOD)、專屬性、耐用性、重現(xiàn)性。其中對于專屬性的定義及驗證方法如下:檢測樣品中可能存在的特定微生物種類的能力。當替代方法以微生物生長作為判斷微生物是否存在時,其專屬性驗證時應(yīng)確認所用培養(yǎng)基的促生長試驗,還應(yīng)考慮樣品的存在對檢驗結(jié)果的影響。當替代方法不是以微生物生長作為判斷指標時,其專屬性驗證應(yīng)確認檢測系統(tǒng)中的外來成分不得干擾試驗而影響結(jié)果,如確認樣品的存在不會對檢驗結(jié)果造成影響。采用替代方法進行控制菌的檢驗,還應(yīng)選擇與控制菌具有類似特性的菌株作為驗證對象。
qPCR法支原體檢測試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機檢測、結(jié)果分析四個環(huán)節(jié)。支原體DNA提取包含樣品前處理(離心分離上清等)、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫;qPCR試劑在配制時需先將試劑放置于室溫,避光放置30min,直至試劑融化,各個試劑組分混勻后按照說明書進行配制并分裝。在實驗室,注意分區(qū)操作,降低實驗發(fā)生污染的風險。用qPCR法進行支原體檢測時,出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么?①如出現(xiàn)非特異性擴增現(xiàn)象,該問題是由反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機前確保管蓋密閉,反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān),需咨詢硬件供應(yīng)商解決。②如出現(xiàn)擴增曲線不平滑現(xiàn)象:可能與ROX加入量不足相關(guān),個別設(shè)備有ROX校正功能,不同型號設(shè)備對ROX的需求量會有差異,需設(shè)置實驗摸索合適的ROX加入量。支原體檢測對實驗室要求有哪些?
支原體(mycoplasma)是目前發(fā)現(xiàn)的蕞小的原核生物,據(jù)統(tǒng)計約15-35%的細胞被支原體污染。支原體污染會改變宿主細胞的結(jié)構(gòu)與功能,易致實驗結(jié)果不穩(wěn)定,須對培養(yǎng)細胞定期進行支原體檢測。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,于定性檢測主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批以及臨床治 療用細胞中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋多種支原體DNA序列,檢測快速,專一性強,靈敏度高,性能可靠。歡迎聯(lián)系!支原體檢測和清理辦法。杭州正揚生物支原體檢測產(chǎn)品
支原體檢測的背景知識與法規(guī)要求。上海肺炎支原體檢測服務(wù)
南京正揚生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測試劑盒包括支原體DNA提取試劑盒(磁珠法)和支原體DNA檢測試劑盒(PCR-熒光探針法),支原體DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定性檢測主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批以及臨床治 療用細胞中是否有支原體污染。試劑盒設(shè)置有內(nèi)參(IC),可對樣品提取至PCR擴增等實驗總流程進行監(jiān)控,避免出現(xiàn)假陰性的情況。本試劑盒涵蓋120多種支原體DNA序列,操作便捷、檢測快速、專一性強、靈敏度高,可提供合規(guī)性能驗證報告。上海肺炎支原體檢測服務(wù)