南京正揚(yáng)CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測原理:試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。PCR反應(yīng)過程中通過熒光標(biāo)記的特異性探針檢測PCR產(chǎn)物量,通過連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)體系中熒光數(shù)值的變化,可即時反映特異性擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化。在反應(yīng)過程中所釋放的熒光強(qiáng)度達(dá)到預(yù)設(shè)的閾值時,體系的PCR循環(huán)數(shù)(Ct值)與該體系所含的起始DNA模板量的對數(shù)值呈線性關(guān)系。采用已知濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)品,依據(jù)以上關(guān)系,構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,對特定模板進(jìn)行定量分析,測定供試品中的外源DNA殘留量。檢測快速、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高,蕞低檢測限可以達(dá)到fg級別。Ecoli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測。寧波畢赤酵母殘留DNA檢測操作流程
南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)了一款E.coli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒,采用qPCR-熒光探針法,在qPCR技術(shù)的基礎(chǔ)上利用熒光探針原理,定量檢測樣本中E.coli殘留DNA,簡化qPCR反應(yīng)操作的反應(yīng)液配置時的操作步驟,檢測快速,專一性強(qiáng),性能可靠,蕞低檢測限可以達(dá)到fg水平。實驗操作步驟包括標(biāo)準(zhǔn)品稀釋、樣品前處理、樣品DNA提取純化、PCR試劑配制及加樣、PCR擴(kuò)增檢測、實驗數(shù)據(jù)分析。
宿主細(xì)胞殘留DNA檢測過程中,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋環(huán)節(jié)有哪些注意事項?①用來做稀釋的耗材建議使用1.5mL離心管,容量太大的耗材會增加DNA的吸附作用,容量太小易導(dǎo)致混勻不充分。②為了做出更好的線性,進(jìn)行倍數(shù)稀釋的時候要吸取較大體積標(biāo)準(zhǔn)品溶液(避免用1μL標(biāo)準(zhǔn)品+9μL稀釋液這樣的小體積體系進(jìn)行稀釋)。③每進(jìn)行一步稀釋都要進(jìn)行充分的混勻,在點(diǎn)樣前也要進(jìn)行混勻。④為了提高準(zhǔn)確性,每個濃度建議做3個復(fù)孔。鄭州SV40&E1A殘留DNA檢測特點(diǎn)qPCR法做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的優(yōu)缺點(diǎn)有哪些?
實時熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍,如宿主細(xì)胞殘留DNA檢測,鼠源、禽源等外源病毒檢測,微生物快檢(支原體、分枝桿菌、細(xì)菌、zhen菌等),復(fù)制型病毒檢測(RCL、RCR、rcAAV等)、質(zhì)??截悢?shù)檢測及其它工藝雜質(zhì)檢測等。qPCR檢測結(jié)果以擴(kuò)增曲線圖呈現(xiàn),正常擴(kuò)增曲線為S型,分為基線期、指數(shù)擴(kuò)增期、線性擴(kuò)增期和平臺期;線形光滑、拐點(diǎn)清晰,基線平直或略微下降,無明顯上揚(yáng)。定量檢測實驗中,對標(biāo)曲的要求主要從斜率(與擴(kuò)增效率相關(guān))和R2兩方面進(jìn)行考察,要求斜率滿足-3.8~-3.1(對應(yīng)擴(kuò)增效率為83.3%~110%),R2滿足高于0.99。
宿主細(xì)胞殘留DNA檢測與重組人源化膠原蛋白行業(yè):①外源性DNA:作為醫(yī)療器械使用的原材料,宜根據(jù)預(yù)期臨床用途(作為植入物體內(nèi)使用,還是作為敷料等體表、黏膜使用)、使用量等,確定外源性DNA殘留量限值。如含重組人源化膠原蛋白的產(chǎn)品預(yù)期為體內(nèi)植人劑,推薦參考生物制品外源性DNA殘留限量要求,結(jié)合殘留DNA宿主類型及其風(fēng)險程度設(shè)定每人每次最大使用量限值。②宿主細(xì)胞蛋白殘留:E.coli、酵母、CHO蛋白質(zhì)殘留應(yīng)≤0.05%(體內(nèi)植人),或≤0.1%(外用)。③殘余抗生su含量:應(yīng)≤50ng/mg。④微生物限度:如以非無菌的方式提供,每1g.每1mL或每10cm2需氧菌總數(shù)應(yīng)≤102CFU,霉菌和酵母菌菌落數(shù)應(yīng)≤10CFU,不應(yīng)檢出大腸埃希菌.金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。HEK293宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒。
宿主細(xì)胞殘留DNA檢測:南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些?①試劑盒經(jīng)過獨(dú)特的設(shè)計開發(fā),可以防止PCR產(chǎn)物污染;②產(chǎn)品檢測靈敏度高,定量限可低至1fg/μL;③試劑盒檢測準(zhǔn)確度高,試劑盒配套定量參考品,且定量參考品均溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)品,每批試劑質(zhì)檢時均會與國家標(biāo)準(zhǔn)品對標(biāo),保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性;④試劑盒穩(wěn)定性好,PCR檢測試劑盒在常溫儲存一周、反復(fù)凍融10次,產(chǎn)品性能仍滿足要求;CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測。南京正揚(yáng)生物質(zhì)粒殘留DNA檢測品牌
為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測?寧波畢赤酵母殘留DNA檢測操作流程
南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些?①重復(fù)性好,同一樣品重復(fù)檢測20次,CV<15%;②提取回收率好,尤其對于低濃度樣品;③操作簡便,無需自行配制試劑;④檢測時間短,從樣品提取純化到出結(jié)果只需2.5h;⑤適應(yīng)性強(qiáng),針對不同機(jī)型,不同實驗室條件,檢測結(jié)果穩(wěn)定;⑥可提供自動化服務(wù),自動化完成樣品核酸提取純化;⑦貨期短,供應(yīng)快;⑧完善的售后服務(wù);
生物制品殘留的宿主細(xì)胞DNA會帶來免疫原性、至瘤性和傳染性的風(fēng)險,探針雜交法和熒光探針法已不能滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制的要求,正逐步被發(fā)達(dá)國家藥典淘汰。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒采用Taqman探針熒光定量PCR原理,可以定量檢測生物制品樣品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。本檢測試劑盒可與南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留DNA提取試劑盒搭配使用,對樣本中殘留的CHO細(xì)胞微量DNA進(jìn)行準(zhǔn)確定量分析。寧波畢赤酵母殘留DNA檢測操作流程